【笔谤辞迟别颈苍迟别肠丑】FlexAble antibody labeling kit 如何應用於多重免疫萤光染色(MultiPlexing) ?
【笔谤辞迟别颈苍迟别肠丑】FlexAble Antibody Labeling Kits
如何应用於『&苍产蝉辫;多重免疫萤光染色&苍产蝉辫;(MultiPlexing) 』?
若要搭配 "传统一二抗" or "Conjugated 萤光抗體" 一同完成多重免疫萤光染色,
可参考以下Case Study :
由於每个 FlexLinker 上带有 2~5個 Fluorophores ,相较於
1. Conjugated 萤光抗體 (约莫 6~8個 Fluorophores ),
2. 传统一二抗之間接標記方式 (多於 8個 Fluorophores ),
FlexAble 嫁接好的抗体 整体的亮度会较低。
因此在初步实验规划时可将 低表达的罢补谤驳别迟 以 传统法 来做,FlexAble 用於 表达量较高的罢补谤驳别迟 会很好抓到实验条件,
至於逼不得已需反向操作时,则须多抓几个条件来对应自身实验。
( P.S.一切實驗安排還是以貴實驗室擁有的成像系統以及實驗目的來做抉擇 )
建议实验步骤如下:
1. 決定好 " 哪些迟补谤驳别迟&苍产蝉辫;" 用 " 何种方法&苍产蝉辫;" 後,首先將传统法的一抗先与sample做反應,一抗辨識後進行 wash 。
2. 隨之加入二抗並進行辨識 & wash ( 1. & 2. 依照各實驗室 or 抗體廠商提供之 Protocol 進行 )。
3. 二抗 Wash 同時,可將 Conjugated 萤光抗體 配製成欲作用之稀釋比率 / 須使用 FlexAble antibody labeling Kits 之抗體与 Kit 進行 Total 10min 之反應,反应后嫁接好萤光的抗體再配製成欲作用之稀释比率。&苍产蝉辫;
4. 將 Conjugated 萤光抗體 与 嫁接好萤光的抗體 一同与 Sample 進行辨認 & wash ( 依照各實驗室or 抗體廠商提供之 Protocol 進行 )。
5. 最後再染上 DAPI 并进行拍摄。&苍产蝉辫;
补充 實驗步驟 ( 3步驟, 10 分鐘, 完成標記 ):
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