ChromoTek — 免疫萤光之讯号放大Nano-Booster

免疫萤光之讯号放大Nano-Booster

在上一篇我们介绍了奈米螢光二抗- 高解析度成像的次世代二級奈米抗體，今天的ChromoTek系列文章，小編要介紹一個特殊的探針工具！這類的Nanobodies（奈米抗體）被開發成奈米探針，ChromoTek將之稱為的Nano-Boosters和Nano-Label 奈米探針 (圖一)。它是由標靶蛋白的羊駝單域抗體V_HH與螢光染劑(Alexa Fluor)共價偶聯在一起。

奈米探针的功能是可以精确的与GFP、Histone、RFP、Spot和Vimentin 结合后利用奈米抗体上所携带的染剂做讯号放大，是理想的超高分辨率成像工具。

产物应用:

免疫萤光(滨贵)
免疫細胞染色 (ICC)
免疫组织化学染色(滨贬颁)
組織透明三維成像 (DISCO)的層光顯微鏡成像 (light-sheet microscopy imaging)
超高分辨率显微镜（厂搁惭）

奈米探针产物特色:

奈米抗體高解析度成像: 增強螢光信號，成像效果更出眾
奈米抗体极佳的组织穿透力
小於2nm 的抗體結構 >> 萤光基团位移偏差小，定位更精确

(圖一) Nano-Boosters和Nano-Label 奈米探針示意圖

(圖二) 奈米探針功能示意圖

下面呈現幾個data 說明一下ChromoTek的Nano-Boosters和Nano-Label 到底怎麼幫助您的實驗，下圖四是利用螢光的方式來看神經元組織的分佈狀況，經實驗測試如果是用傳統的 anti-GFP 抗體，會因傳統抗體的體積過大而無法穿透過組織，使得GFP成像效果不佳 (圖三) ，反之使用 GFP-Booster 因為奈米抗體體積較小螢光染色會較均勻且訊號更強。

(圖三) 轉基因鼠的組織表達了Cx3Cr1-EGFP

(图上) EGFP以傳統抗體anti-GFP antibody Alexa 647方式增強EGFP訊號。

(图下) EGFP以奈米抗體 GFP-Booster Atto647N (产物编号: ) 式增強EGFP訊號。

(圖四) whole-body neuronal connectivity map of an adult mouse

红色:肌肉组织

白色:骨头和器官

绿色:神经元

漂白效应:

另外; 常常在做螢光成像的會發現一個現象，即是剛開始螢光相當明亮，但隨著時間遞增螢光訊號則逐漸遞減 (圖五)，這是所謂的光漂白效应。

(图五)萤光激发后36秒造成的光漂白现象　(图片取自罢丑别谤尘辞官网)

当您要為暗淡或低表现量的目标蛋白尝试进行定量分析时，褪色可能是个问题。如果要执行任何类型的图像定量，请务必考虑由於光漂白引起的任何萤光损失，因為它会使得定量数据失準并给您带来错误的结果。

(图六)

左:mRFP在螢光激發3秒後即快速衰退,使用RFP-Booster_Atto 594 加強訊號後能延緩螢光衰退.

中:使用GFP GFP-Booster_Atto488 後螢光大幅增強.

右:图片為果蝇幼虫中央神经系统使用骋贵笔-叠辞辞蝉迟别谤冲础罢罢翱488来增强多巴胺神经元骋贵笔的讯号.

最後我們展示一張我們使用GFP-Booster Alexa Fluor 488 （貨號：）和RFP-Booster Alexa Fluor 568 （貨號：）进行讯号放大的结果

HeLa cells were transiently transfected with Tom70-eGFP and PCNA-mRFP.

绿色：GFP-Booster Alexa Fluor 488 （貨號：）&苍产蝉辫;

红色：RFP-Booster Alexa Fluor 568 （貨號：）

Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.

产物一览

产物名称	产物编号	应用
GFP-Booster Alexa Fluor^®488		IF, SRM
GFP-Booster Alexa Fluor^®568		IF, SRM
GFP-Booster Alexa Fluor^®647		IF, SRM
GFP-Booster_ATTO488		IF, SRM
GFP-Booster_ATTO594		IF, SRM
GFP-Booster_ATTO647N		IF, SRM
Histone-Label_Atto488		IF, SRM
RFP-Booster Alexa Fluor^®568		IF, SRM
RFP-Booster Alexa Fluor^®647		IF, SRM
RFP-Booster_ATTO594		IF, SRM
RFP-Booster_ATTO647N		IF, SRM
Spot-Label ATTO488		IF, SRM, WB
Spot-Label ATTO594		IF, SRM, WB
Vimentin-Label_Atto488		IF, SRM

常见问题

1. 哪些 Nano-Booster 和 Nano-Label 產品被推薦用於超解析度顯微鏡 ?

Nano-Booster 和 Nano-Label 相關產品都非常適合用於超解析度顯微鏡。由於相比於 15 nm線性尺寸的傳統抗體，這系列的產品體積很小，只有 2-3 nm，可以最大限度地減少交聯誤差以及提供更精確和緻密的染色。Nano-Booster 和 Nano-Label 相關產品具體螢光標記物的選擇取決於使用的顯微鏡設置和鐳射。我們推薦 :

- STED: ATTO647N, Abberior STAR 635P

- STORM: Alexa Fluor 647, ATTO488

- SIM: ATTO488/594

2. Nano-Labels 相关产物是否适用於活细胞染色成像 ?

Nano-Labels 相關產品是小蛋白質分子，因此它們不能穿透非通透性的細胞膜。如果需要將 Nano-Labels 相關產品導入活細胞，可能需要应用蛋白質轉導方法 ( 如電穿孔法 ) 或試劑，但根據我們的經驗，最有效的方法是顯微注射法。例如 Histone-Label

和 Vimentin-Label 產品進行活細胞染色。

更多产物资讯如下:

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